Η δοκιμή PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) είναι μια τεχνολογία πυρήνα στη μοριακή διάγνωση. Η τυποποίηση των διαδικασιών συσκευασίας και δοκιμών επηρεάζει άμεσα την ακρίβεια και τη βιοασφάλεια των αποτελεσμάτων. Αυτό το άρθρο παρέχει μια επαγγελματική προοπτική στα βασικά σημεία ελέγχου ποιότητας σε όλη τη διαδικασία δοκιμής PCR.
Η παραλαβή του δείγματος και η προεπεξεργασία είναι τα πρώτα βήματα της διαδικασίας. Τα εργαστήρια πρέπει να επαληθεύουν αυστηρά την ταυτοποίηση του δείγματος, τις συνθήκες μεταφοράς και τον χρόνο αποθήκευσης για να εξασφαλίσουν την ακεραιότητα του δείγματος. Μετά την παραλαβή, τα δείγματα πρέπει να αριθμούνται και να καταχωρούνται σε ένα υπουργικό συμβούλιο βιοασφάλειας και να υποβληθούν σε διαδικασίες επεξεργασίας πριν από τη λύση και την εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος με βάση τον τύπο δοκιμής. Ένα σύστημα επαλήθευσης δύο - απαιτείται κατά τη διάρκεια αυτού του σταδίου για να αποφευχθεί η μόλυνση σταυροειδούς -.
Η προετοιμασία του συστήματος αντίδρασης PCR πρέπει να εκτελείται μέσα σε καθαρό πάγκο. Οι χειριστές πρέπει να φορούν εξοπλισμό προστασίας επιπέδου 3 και να χρησιμοποιούν νουκλεάση - δωρεάν αναλώσιμα. Το παρασκεύασμα αντιδραστηρίων ακολουθεί την αρχή της ροής εργασίας "μονής κατεύθυνσης", που μετακινείται από την περιοχή παρασκευής του αντιδραστηρίου στην περιοχή επεξεργασίας δείγματος και στη συνέχεια στην περιοχή ενίσχυσης. Οι αρνητικοί έλεγχοι, οι θετικοί έλεγχοι και οι εσωτερικοί έλεγχοι πρέπει να περιλαμβάνονται σε κάθε παρτίδα αντίδρασης για την παρακολούθηση της πειραματικής εγκυρότητας.
Κατά τη διάρκεια της φάσης ενίσχυσης και δοκιμής, το όργανο PCR πρέπει να είναι προ -- βαθμονομημένες και παραμέτρους ποδηλασίας θερμοκρασίας επαληθεύονται. Η διαδικασία αντίδρασης περιλαμβάνει τυπικά τρία βήματα: μετουσίωση (94 - 95 βαθμοί), ανόπτηση (50-65 βαθμούς) και επέκταση (72 μοίρες). Ο αριθμός των κύκλων ρυθμίζεται με βάση το στόχο ανίχνευσης. Η PCR φθορισμού σε πραγματικό χρόνο απαιτεί επίσης την παρακολούθηση του κατωφλίου σήματος φθορισμού συγκεκριμένων καναλιών.
Η ανάλυση των αποτελεσμάτων και η αναφορά πρέπει να πραγματοποιούνται από ειδικευμένους τεχνικούς. Τα ακατέργαστα δεδομένα πρέπει να αναθεωρηθούν από τουλάχιστον δύο επαγγελματίες για να επιβεβαιώσουν τη μορφολογία της καμπύλης ενίσχυσης, την αξιοπιστία της τιμής CT και τη συμμόρφωση των υλικών ελέγχου ποιότητας με τα πρότυπα. Η τελική έκθεση πρέπει να περιλαμβάνει πληροφορίες σχετικά με τη μεθοδολογία δοκιμής, τη βάση για την ερμηνεία των αποτελεσμάτων και μια δήλωση περιορισμών δοκιμών.
Η όλη διαδικασία ακολουθεί αυστηρά τις προδιαγραφές ISO 15189 και τις σχετικές προδιαγραφές CDC. Εφαρμόζεται ένα σύστημα τριπλής εγγύησης για την παρακολούθηση του περιβάλλοντος, τη συντήρηση του εξοπλισμού και την κατάρτιση προσωπικού για να εξασφαλιστεί η αξιοπιστία και η ανιχνευσιμότητα των δοκιμών PCR.